DETECÇÃO DE MUTAÇÕES NO GENE DA
PROTEÍNA SUPRESSORA DE TUMOR p53 POR PCR-SSCP

1. INDICAÇÕES:

Mutações que afetam o gene da proteína p53 estão associadas a neoplasias malígnas. Entre estas, as mais comuns são o câncer de cólon (70% dos casos), pulmão (50% dos casos) e mama (40%). Alterações no gene da p53 podem ser herdadas por estarem presentes nas células germinativas. Tal fato ocorre nos portadores da síndrome de Li-Fraumeni bem como nas demais neoplasias hereditárias. Um diagnóstico anátomo-patológico negativo (incluindo imunohistoquímica) da margem de segurança de ressecção cirúrgica ou de biópsia não exclui a possibilidade de mutações. Caso estas ocorram, a chance de recidiva da doença é elevada daí a necessidade do uso de técnicas mais sensíveis a fim de avaliar-se tais alterações.
A análise de mutações na p53, é particularmente importante no acompanhamento das neoplasias.

2. AMOSTRA:
-Sangue
-Biópsia ou ressecção cirúrgica, devendo o material ser colocado em tubo estéril sem adição de conservantes.
-Material fixado em lâmina (mínimo de oito lâminas) ou bloco de parafina.
OBS: Sempre que possível evitar o bloco de parafina pois o método de fixação pode levar ao aparecimento de contaminantes que prejudiquem a técnica.

3. TRANSPORTE DA AMOSTRA:
Qualquer amostra deverá ser transportada, de preferência refrigerada e entregue ao laboratório no prazo de 24 horas exceto no caso de lâmina ou bloco de parafina.

OBS: Jamais congelar a amostra. O laboratório não se responsabiliza quanto a resultados obtidos a partir de amostras indevidamente coletadas ou transportadas, reservando-se o direito de, dependendo do caso, rejeitar a amostra.

4.PREPARO DO PACIENTE:

Não é necessário.

5. MÉTODO:
Técnica da reação em cadeia pela polimerase seguida de análise de polimorfismo de conformação de fita única (PCR-SSCP) nos exons 5, 6, 7, 8 do DNA.

Vantagens do método:
- Maior sensibilidade que os métodos rotineiros para detecção de mutações na p53.

Limitações do método:
A técnica só identifica mutações nos exons 5,6,7 e 8 que estão presentes na região funcional da proteína. Esta análise não exclui a possibilidade de mutações em outros pontos do gene. A amostra investigada pode não apresentar células onde se observem mutações devido à heterogeneidade das neoplasias.
A amostra investigada pode apresentar um número de células com mutações na p53 abaixo da sensibilidade do método.

6.VALOR DE REFERÊNCIA:

Negativo: ausência de mutações detectáveis em qualquer um dos exons analisados.
Positivo: presença de mutações detectáveis em qualquer um dos exons analisados.

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